享誉中外，药物进入机体后，能够在各类酶的催化下发生代谢变更，生成机关四面的代谢产物。尽管布局与母药类似，然则代谢产物绝对算是工程研发中呈现的新化学因素。操作动物和体外手段对候选化合物进行毒理研究，通常更关注母药本性，而非代谢产物。何况动物种属与人体可能具备差异，不克不及简单要是所孕育发生的代谢产物就与人体就沟通，当某种代谢产物在人体中的袒露量与植物种属弗成比例(disproportional)时，就存在安然性风险。鉴于此，代谢产物安然性评价(MIST，Metabolites in Safety Testing)的观点被提出。
自上世纪90年代初，液质联用技能(LC-MS)取患有攻破性发展，革新了药物代谢领域的手艺才具，在诸如血浆等冗杂基质中代谢产物的判定也变得相对容易。再加上放射性标志的ADME(吸收、散布、代谢和分泌)研讨能够对血浆、尿液与粪便生成定量代谢产物谱图，使得代谢产物研究成为药物研发的须要构成部份。
虽然通常药物对垦荒团队来说都很清晰代谢产物可能有药效活性或者毒性劝化，需要予以考察，但是具体到工程，却面对如下问题：
1.哪些代谢产物需要纳入安然评价规模？
2.是否具有代谢物裸露量的阈值，来抉择进一步研讨的必要性？
3.代谢产物的化学构造能否有必要获得？
这些都需要有关系可遵循的律例或带领原则。
MIST导游准则的变迁
2002年，饱受人体代谢产物平安性侵陵的工业界率先“起事”，一群来自一致公司和组织的科学家共同颁布发表了药物代谢产物风险评估的倡导书(参照文章2)，文章提出在人体血浆中裸露量占比逾越药物干系精力总量25%的代谢产物，必需在病例前毒理种属研讨中获取掩饰笼罩，这是首次对付MIST的阐述。
2008年，FDA终于发布了MIST的统率原则，将代谢物的阈值调解为人体血浆中药物原型的10%。
2010年在综合了更广泛的见解后，ICH发布了指导定见，提出在人体血浆中裸露量占比超越药物关连精力总量10%的代谢产物，在展开大规模临床试验前，有必要对其进行非临床安全性研讨(ICH M3(R2)。FDA随后跟进，在2016年修正导游原则与ICH看齐。
图片整顿自参考文章
这些统率准则在药物平安性研讨方面的促成感化毋庸置疑，但更需求的是它们提供了一个框架，让药物研发对代谢产物的钻研有据可依。从病例前光降床，每一个阶段所要设计的药物代谢题目不尽相同，可能因战略及靶点而不合。如肿瘤初期、耐药HIV(艾滋病病毒)、先本能酶缺乏症等严重疾病的药物斥地，对代谢产物保险性研究有响应简化按次。对常规项目，代谢产物榜样战略可以分为三个阶段来描述：
第一阶段 (Pre-IND)
在此阶段，药物代谢研讨首要针对体外(in vitro)和执行动物(in vivo)，如肝微粒体、肝细胞、肝S9，重组酶大要血浆等。操纵这些体外模子来孵育代谢产物，羁縻生活生计时间和质谱裂解规律来比照差异种属和人类的代谢产物定性/定量的差异，据此选择符合的种属开展毒理研究。或是研究动物给药后的体内代谢产物，和体外研讨相反相成。动物的体内结果其实不克不及直接转化为对病例的切确意料，而是经过剖析植物的主要代谢产物，果决代谢物谱能否能够笼盖人体结果，这对临床的安全性研讨相当紧要。
第二阶段 (病例I期)
病例I期多剂量递增试验(MAD)的稳态血浆样板可以用于人体代谢产物研讨，这通常也是初次失去药物的人体代谢产物数据。LC-MS灵活度虽然可以满足微量代谢产物的分析，然则合成代谢产物规范品任务量过大，可以遵照紫外吸引数据合计代谢产物与母药的相对丰度。
对于导游准则中代谢产物逾越药物干系物质总量的10%，若何武断？如果将母药和所有代谢产物进行定量加与，需要大量合成规范品，显然不实际。集团来说在这个阶段，还不需要准注定量，只需对比NOAEL(无明明损害浸染剂量)下毒理种属的代谢产物和临床药效剂量下血浆代谢产物的结果，果决能否存在临床前未覆盖的代谢产物即可。常用方式有两种，一种是用Hamilton Pooling法算计代谢产物的“露出量倍数”；另外一种是寄托同位素符号试验，遵照啮齿类同位素符号的肉体均衡结果，对比大鼠的同位素符号代谢产物浓度获取因子，进而换算人体代谢产物的浓度。
必定了临床前代谢产物的掩饰笼罩状况，就能抉择能否需要合成代谢物，可否需要开展专程的体内与毒理研讨。但是良多研究团队选择把这一部单干作而后放一放，在完成年人体同位素ADME钻研后再做决意，更有将针对代谢产物的研究放在病例观点考据(PoC)之后的，这也算是防止由于PoC打败仗做太多“无勤奋”。
图片源自FDA网站
第三阶段 (病例II期后，临床III期前)
由于对主要代谢产物的研讨必须在精简病例前实现，以是在这个阶段所有必要的代谢物研讨都应该完毕了。搜聚代谢物定量、独霸高分辨质谱肯定未知代谢产物、人体同位素标志ADME钻研(还可以用于必定哪些代谢物需要DDI评价)以获得所有代谢物谱图等。
对MIST的一些思考
从2008年FDA发布MIST领导准则至今已经十余年了，这十年间，对代谢产物和代谢平安性的重视逐渐深切民气，制药产业也曾适应了MIST指南的要求，多量案例也为研发团队的代谢物研讨计划提供了很好的自创。然而也遇到了不少的问题，首先，很少有项目真的睁开过对代谢物的毒理研究，也很难找到循环代谢物直接引起安全标题问题的案例。很多环境下，明明平安标题曾经指向代谢物，但终极又拿不出匮乏的证据。一方面这可能是由于代谢物和母药的性质很难辨别，另一方面，对于一些活性两端代谢物，惯例解析方法无意偶尔检测不到，造成很浩劫度。药物依帕列净 (Empagliflozin) 给以大鼠后，窥察到显然的由代谢物介导的毒性，但未发现活性代谢物和粗鄙代谢物。
案例一(图片收拾整顿自参照文章)
其次，反应性代谢物或下游产物(如谷胱甘肽或半胱氨酸连络物的代谢物)由于其份子量与亲水性高，通常经过胆汁和/或尿液火速分泌，是以很难依据MIST的要求相比差别种属间反馈性代谢物的裸露量差异。另外，在一些特定工程中测定靶组织中代谢物可能更为需要，却难以在人体展开。换句话说，随着妙技的进行，对代谢产物的钻研要做到何种水准？MIST所做的全数能否真的影响了药物保险性评价，这些但凡未来我们需要去思忖与意图的。
案例二(图片整理自参照文章)
导游准则只不过提供了一个标的目的，对每个项目未必要case by case的去针对性设计研究方案，除了老例毒性，还应关注代谢物荫蔽的DDI发生。吉非罗齐 (Gemfibrozil)的葡萄糖醛酸化代谢物对西立伐他汀(cerivastatin)的代谢肃清压迫(首要由CYP2C8与OATP1B1介导)招致了很有问题的终归。别的另有丁苯丙酮的代谢物对CYP2D6评释水平的影响，以及去甲基地尔硫卓对CYP3A4的抑打造用等。FDA和EMA的向导原则离别首倡，当代谢物的体内水平到达母药的25%(FDA, 2012)，或暴露量逾越药物总露出量的10%时(EMA, 2012)，需要对代谢产物的CYP按捺与转运体克制开展研究。FDA在2017年新的相关导游原则征求见解稿中进一步申请，对警示性化学构造(官能团)，需要开展TDI(年光依赖性压榨)研讨；对极性小于母药且露出量超过母药25%的代谢产物，以及极性大于母药且暴露量高于母药的代谢产物，需要展开代谢物体外DDI研究。
归正，MIST率领原则的提出不单仅是DMPK科学家的钻研参考，很大水平上也让药化、药理等科学家对代谢产物的安然性标题给予足够的器重，只有这样，新药的平安评价才会愈加纯粹，这也是MIST对药物研发最大的奉献。
